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《分子生物学》教学大纲
课程编号：38030041
课程名称：分子生物学
学分： 5 总学时：112 实验学时：56 ：
先修课程要求：细胞生物学、生物化学
适应专业：生物科学
参考教材：
1.胡维新主编 《医学分子生物学》.北京:科学出版社. 2007
2.胡维新主编.《医学分子生物学》长沙：中南大学出版社. 2001
3.Robert F. Weaver编著. 《Molecular Biology》(第二版). 北京：科学出版社. 2002
4.Sambrook and Ruussell编著. 《Molecular Cloning》(第三版). 西安：世界图书出版公司. 2002
5.冯作化主编, 《医学分子生物学》.北京: 人民卫生出版社. 2001
6.Timothy M. Cox & John Sinclair编著. 《Medicine Molecular Biology》. 北京：科学出版社. 2000
7.张迺蘅主编. 《医学分子生物学》. 北京：北京医科大学出版社. 1999
8.陈丙莺，陈子兴，主编. 《分子生物学基础与临床》. 南京：东南大学出版社. 2000
一、课程在培养方案中的地位、目的和任务
本课程是生物科学专业必修基础课，分子生物学是21世纪生命科学的前沿和核心学科，并已渗透到生命科学的各个领域。分子生物学理论教学系统阐述了当今分子生物学学科新理论、新技术、新进展。通过开设此课程，目的在于向学生传授分子生物学的基本原理和方法，以及涉及该学科的最新研究进展。要求学生通过学习此课程掌握分子生物学的基本理论、基本知识、基本技能；熟悉本学科的主要新进展和新技术，了解分子生物学在生物学和医学中的应用。
二、课程的基本要求
1. 基本理论和基本知识
（1） 了解分子生物学的发展简史和医学的关系。
（2） 掌握基因的概念及结构特点，掌握中心法则的基本内容；熟悉基因突变在进化及医学上的意义；了解基因命名的基本原则、人及小鼠基因的命名法。
（3） 掌握基因组的概念及病毒、原核生物、真核生物基因组的结构特点；熟悉基因组变异的生理和病理意义；了解人类基因组学的概念及人类基因组计划的研究内容。
（4） 了解DNA结构受损伤的因素，损伤的类型及其效应。DNA损伤和修复的重要生物学意义。掌握主要的DNA修复方式的原理：切除修复、重组修复和SOS修复。熟悉细胞周期检查点控制是真核生物诱导修复的主要机制。
（5） 熟悉原核基因表达的特点；掌握原核基因的调控机制；熟悉真核基因表达的特点；掌握真核生物转录水平的调控机制；了解基因表达的“统一理论”。
（6） 了解两种DNA序列测定的原理及其主要应用；掌握Southern 杂交和PCR等技术原理及在分析基因拷贝数的应用；Northern blot和RT-PCR技术原理及在基因转录水平变化分析中的应用；Western blot 原理及在特定基因产物-蛋白质分析中的应用。
（7） 掌握利用反义RNA抑制基因表达和RNAi技术沉默特定基因以鉴定基因功能的原理与方法；熟悉利用转基因动物和细胞模型研究基因功能的原理与方法；熟悉利用转基因敲除模型研究基因功能的原理与方法。
（8） 熟悉限制性核酸内切酶和其他常用工具酶的特点；掌握常用克隆载体的结构特点；掌握基因克隆的基本过程；掌握外源基因在大肠杆菌和哺乳动物细胞中的表达原理和方法;熟悉定点诱变技术原理；了解昆虫和酵母表达系统。
（9） 掌握基因突变的概念、类型及其特点；熟悉基因突变的发生过程；熟悉鉴定疾病相关基因的技术；了解结构基因突变导致疾病发生的分子机制。
（10） 掌握蛋白质组、蛋白质组学概念，蛋白质组学的基本研究方法，熟悉蛋白质组与生物信息学、定量蛋白质组学，了解蛋白质组学在疾病研究中的应用。
（11） 掌握基因诊断的基本概念、基本原理和主要内容；熟悉各种基因诊断技术的特点；掌握基因诊断的基本策略；了解基因转移的靶细胞；了解基因诊断技术的发展过程。
（12） 掌握基因治疗的概念、原理及基因治疗的基本策略，基因治疗的常用载体，基因治疗的靶细胞；熟悉治疗基因的受控表达原理与方法，基因转移的基本技术；基因干预的基本技术。
（13） 熟悉分子生物学前沿进展，了解科研设计思路。
2、基本技能
（1） 掌握琼脂糖凝胶电泳的原理和电泳结果的分析方法。
（2） 掌握人类基因组DNA的提取及电泳分析方法。
（3） 熟悉核酸浓度测定的原理与方法。
（4） 掌握真核细胞质RNA的提取及琼脂糖凝胶电泳分析方法。
（5） 掌握PCR反应的操作步骤及其琼脂糖凝胶电泳检测方法。
（6） 掌握感受态细胞制备及大肠杆菌转化的原理及操作步骤。
（7） 掌握碱裂解法小量提取质粒DNA的方法。
（8） 掌握重组质粒DNA的酶切鉴定方法及琼脂糖凝胶电泳分析方法。
（9） 熟悉Southern 印迹转移、探针标记、分子杂交的原理和方法。
（10） 掌握PCR－SSCP分析的原理和方法。
三、课程的基本内容以及重点难点
第一章 绪论  回顶部>>
目的要求
了解：分子生物学的定义、研究对象和研究内容；分子生物学发展简史；生物遗传物质的发现；现代分子生物学的建立和深入发展；分子生物学与相关学科的关系；分子生物学在医学和生物学中的应用。
讲课时数：2 学时
教学内容：
第一节 分子生物学的研究对象
1.分子生物学的定义
2.分子生物学的研究内容
第二节 分子生物学发展简史
1.生物遗传物质的发现
2.现代分子生物学的建立
3.现代分子生物学的深入发展
第三节 分子生物学与相关学科的关系
1.分子生物学与生物化学
2.分子生物学与细胞生物学
3.分子生物学与遗传学
4.分子生物学与生物技术
第四节 分子生物学与医学未来
1.分子生物学在医学和生物学中的应用
2.分子生物学与基础医学
3.分子生物学和病理学
教学方法（建议）： 讲授法
教学手段：多媒体教学
自学内容：
第二章 基因与基因组 回顶部>>
目的要求
掌握：基因的概念及结构特点；中心法则；基因转录调控相关序列；多顺反子，单顺反子；真核基因与 原核基因的结构特点。基因组的概念；病毒、细菌及真核生物基因组的结构特征。
熟悉：基因突变的意义。基因组变异的生理和病理学意义。
了解：基因的命名法。基因组学；人类基因组计划。
重点：基因转录调控相关序列；多顺反子，单顺反子；基因组的概念；病毒、细菌及真核生
物基因组的结构特征。
难点：基因的结构特点。真核生物基因组的结构特征。
讲课时数：4 学时
教学内容：
第一节 基因
1. 基因的概念
2. 结构基因
3. 基因的调控序列
第二节 基因组
1. 病毒基因组
2. 原核基因组
3. 真核基因组
4. 人类基因组的特点
5. 基因组学
教学方法（建议）： 讲授法
教学手段：多媒体教学
第五章 基因表达的调控 回顶部>>
目的要求
掌握: 管家基因、基因表达、诱导表达、阻遏表达、协调表达、基因表达调控、操纵子、反式作用因子、顺式作用元件、组织特异性表达等基本概念。原核基因乳糖操纵子的转录调控机制；真核生物转录水平的调控机制。
熟悉: 不同操纵子的转录调控机制；真核基因表达调控的各个水平；DNA水平调控的不同方式；反式作用因子的主要特点和调节方式；转录后调控的不同环节；翻译水平和翻译后水平调控的基本环节。
了解: 原核生物翻译水平的调控机制；反式作用因子结构域模式和反式作用因子的作用方式；基因表达的“统一理论”。
重点: 原核基因操纵子的转录调控机制；真核基因转录水平的调控机制。
难点：原核基因操纵子的转录调控机制。
讲课时数：4 学时
教学内容：
第一节 原核基因表达调控
1．转录水平调控
影响转录的因素，不同操纵子的转录调控机制
2．翻译水平调控
第二节 真核基因表达调控
1．DNA水平调控
2．转录水平调控
3．转录起始复合调控
4．转录后水平调控
5．翻译水平调控
6．翻译后水平调控
第三节 基因表达的“统一理论”
教学方法（建议）： 讲授法
教学手段：多媒体教学
第六章 DNA损伤与修复 回顶部>>
目的要求
掌握：主要的DNA修复方式：切除修复、重组修复和SOS修复。
熟悉：真核生物诱导修复的主要机制。
了解：DNA结构受损伤的因素；损伤的类型及其效应；DNA损伤和修复的重要生物学意义。
重点：DNA主要修复方式及特点。
难点: 真核生物诱导修复的主要机制与特点。
讲课时数：2 学时
教学内容：
第一节 DNA损伤的因素及机制
1． DNA损伤的因素
2． DNA损伤的机制
3．DNA损伤的结果
第二节 DNA损伤修复机制
1．直接修复
2．切除修复
3．重组修复
4．SOS修复
5．细胞周期检查点控制
第三节 DNA损伤和修复的参考标志
第三节 DNA损伤和修复的生物学意义
教学方法（建议）： 讲授法
教学手段：多媒体教学
第七章 基因结构与表达分析的基本策略 回顶部>>
目的要求
掌握：Southern 杂交和PCR等技术原理及在分析基因拷贝数的应用；Northern blot和RT-PCR技术原理及 在基因转录水平变化分析中的应用；
熟悉：Western blot 原理及在特定基因产物-蛋白质分析中的应用。
了解：DNA序列测定的原理及其主要应用；RNA酶保护试验原理及应用；原位杂交技术；DNA微阵列技术原理；流式细胞术的应用；免疫组化方法的应用。
重点：Southern 杂交和PCR等技术原理及应用；Northern blot和RT-PCR技术原理及应用Western blot 原理及应用。
难点：RNA酶保护试验原理及应用。
讲课时数：3学时
教学内容：
第一节 DNA定性、定量分析
1. DNA序列测定
DNA序列测定技术的原理和特点
DNA序列测定与医学研究
2. Southern 杂交和PCR技术
3. 原位杂交技术
第二节 RNA定性、定量分析
1．基因表达分析
Northern blot和RT-PCR技术
2. RNA酶保护试验
3. DNA微阵列技术
第三节 蛋白质的定性、定量、定位分析
1. Western blot 分析
2. 流式细胞术
3. 免疫组化方法
教学方法（建议）： 讲授法
教学手段：多媒体教学
第八章 基因工程与基因体外表达 回顶部>>
目的要求
掌握：常用克隆载体；基因克隆的基本过程；外源基因在大肠杆菌和哺乳动物细胞中表达的原理和方法。
熟悉：限制性核酸内切酶和其他常用工具酶的概念和特点；定点诱变技术原理。
了解：昆虫表达系统；酵母表达系统。
重点：基因克隆的基本过程。
难点：α－互补筛选；阳性转染细胞的筛选；定点诱变技术原理。
讲课时数：6学时
教学内容：
第一节 基因克隆工具酶
1. 限制性核酸内切酶
2. 其他常用工具酶
第二节 基因克隆载体
1. 质粒、λ噬菌体、粘粒、M13噬菌体和病毒载体
2. 外源基因的导入和表达
第三节 基因克隆的基本过程
1. 目的基因获取
2. 载体的选择和准备
3. DNA片段的体外连接
4. 重组DNA导入宿主细胞、扩增
5. 重组DNA的筛选与鉴定
第四节 真核细胞的转染
1. 真核细胞转染的方法与基本原理
2. 阳性转染细胞的筛选
第五节 利用重组DNA技术对基因进行改造
定点诱变与蛋白质工程
第六节 克隆基因的表达
1. 大肠杆菌表达系统
2. 哺乳动物细胞表达系统
3. 其他表达系统
第二节 电子克隆
教学方法（建议）： 讲授法
教学手段：多媒体教学
第九章 蛋白质组学的研究方法和进展 回顶部>>
目的要求
掌握：蛋白质组、蛋白质组学概念，蛋白质组学的基本研究方法（双向电泳、生物质谱技术、酵母双杂 交、噬菌体显示技术、蛋白质芯片技术）。
熟悉： 蛋白质组与生物信息学、定量蛋白质组学
了解：蛋白质组学在疾病研究中的应用。
重点：蛋白质组学概念与研究方法。
难点：蛋白质功能模式的研究方法。
授课学时：2 学时
基本内容
第一节 蛋白质组学的概念及其发展简史
1．蛋白质组学的概念
2．蛋白质组学的产生和发展
第二节 蛋白质组学研究方法概述
1．蛋白质组表达模式的研究方法
2．蛋白质组功能模式的研究方法
第三节 蛋白质组学在疾病研究中的应用
第十一章 疾病产生的分子基础 回顶部>>
目的要求
掌握：基因突变的概念、类型及特点。
熟悉：基因突变的发生机制；疾病相关基因克隆。
了解：基因突变与疾病发生；血红蛋白病等常见单基因病的发病分子机制。
重点：基因突变的类型及特点。
难点：基因突变的分子机制。
讲课时数：4 学时
教学内容：
第一节 基因结构与表达异常与疾病发生
1．基因结构改变
2．细胞间信号异常
3． 细胞内因素
第二节 基因结构和表达与疾病的研究策略
1．结构分析基因变异
2．基因表达水平分析
3．致病基因确定
第三节 疾病相关基因的功能克隆和定位克隆
1．疾病相关基因
2．功能克隆
4． 定位克隆
教学方法（建议）： 讲授法
教学手段：多媒体教学
第十二章 基因诊断 回顶部>>
目的要求
掌握：基因诊断的概念、原理及其特点；常用基因诊断策略、基本技术及其应用。
熟悉：遗传病、肿瘤及感染性疾病的基因诊断策略及方法。
了解：基因诊断的发展；基因诊断临床应用中存在的问题；几种常见遗传病的基因诊断。
重点：基因诊断的概念、原理及特点；常用基因诊断策略、基本技术及其应用。
难点：基因诊断策略；基因诊断的基本技术及其原理。
讲课时数：4学时
教学内容：
第一节 基因诊断的技术和方法
1． 基因诊断的方法、原理：核酸分子杂交和PCR扩增及其他常用的基因诊断技术
2． 基因诊断的特点
第二节 基因诊断策略
1． 检测致病基因突变
2． 分析与疾病连锁的遗传标志
3． 建立多基因疾病表型克隆
4． 定量分析致病基因的表达水平
第三节 基因诊断的应用前景
1． 基因诊断技术的发展史及其前景
2. 当前基因诊断存在的问题
第四节 遗传病的基因诊断
1. 直接和间接诊断途径
2. 几种遗传病的发病机制及适用诊断技术。
第五节 肿瘤的基因诊断
1． 肿瘤基因诊断策略
2． 肿瘤染色体异位及融合基因
3． 癌基因和抑癌基因
4． 肿瘤相关病毒
5． 肿瘤标志物基因
第六节 感染性疾病的基因诊断
1． 特点
2． 感染性疾病：病毒、细菌、寄生虫等
教学方法（建议）： 讲授法
教学手段：多媒体教学
第十三章 基因治疗原理与研究进展 回顶部>>
目的要求
掌握：基因治疗的概念、基本策略、常用载体；治疗基因的受控表达原理与方法。
熟悉：基因转移的基本技术；基因干预的基本策略；基因治疗的应用研究。
了解：基因转移的靶细胞;基因治疗的前景与问题；人类生殖细胞基因治疗研究的伦理学问题。
重点：基因治疗的策略：如基因置换、基因添加、基因干预、自杀基因治疗、免疫基因治疗等；体内基因转移的方法。
难点：不同类型的疾病应采用不同的治疗策略；基因干预方法与原理；治疗基因的受控表达原理与方法。
讲课时数：4学时
教学内容：
第一节 基因治疗的概念和基本策略
1．基因治疗的概念
2．基因置换
利用基因同源重组技术（基因打靶），使基因置换得以实现。
3．基因添加
基因添加或称基因增补是通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。
4．基因干预
基因干预是指采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者破坏某个基因的结构而使之不表达。
5．自杀基因治疗
自杀基因治疗的原理是将“自杀”基因转移入宿主细胞中，这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞产生“自杀”效应。
6．基因修饰
第二节 基因转移的基本技术
1．病毒介导的基因转移系统
逆转录病毒载体：逆转录病毒前病毒的结构特点
腺病毒载体
腺病毒相关病毒（AAV）载体
单纯性疱疹病毒(HSV)载体：HSV的特点与用途
2．非病毒载体介导的基因转移系统
脂质体介导的基因转移技术
受体介导的转移技术
基因直接注射技术
其它方法
3. 基因转移的靶细胞
第三节 基因干预的基本技术的原理与方法
1．反义RNA
2．干扰RNA
3．核酶
4．三链DNA
第四节 治疗基因受控表达的原理
1．基因内部调节机制
2．基因外部调节机制
3．利用病灶微环境使治疗基因特异性表达
4．治疗基因的诱导表达， Tet-Off/Tet-On基因表达调控系统的原理
第五节 基因治疗的应用研究
1．遗传病
2．恶性肿瘤
3．病毒性疾病
4．其他疾病
第六节 基因治疗的前景与问题
1．安全性问题
2．伦理问题
3． 当前存在的技术问题：基因调控元件的选择； 安全高效载体的构建和转移技术的选择
教学方法（建议）： 讲授法
教学手段：多媒体教学
第十四章 分子生物学讲座 （6 学时） 回顶部>>
着重介绍分子生物学在相关研究领域的应用。
第十五章 学术研讨 （26 学时） 回顶部>>
着重介绍分子生物学科研设计策略。
四、实验要求
实验方式：本大纲的实验（2人/组）由学生独立操作完成。在带教老师的指导下，要求学生通过学习，能基本掌握分子生物学常用实验的基本原理和操作。
具体实验要求如下：
实验一：分子生物学基本实验操作技能及感受态细胞的制备
1. 了解分子生物学实验常用装置和常用仪器设备的使用。
2. 掌握感受态细胞制备的原理及操作步骤。
3. 掌握采用CaCl2方法制备大肠杆菌DH5α感受态细胞。
4. 掌握感受态细胞的冻存方法。
实验二：大肠杆菌转化
1.掌握基因克隆的基本步骤。
2.熟悉重组子的筛选方法。
实验三：琼脂糖凝胶电泳
掌握琼脂糖凝胶电泳的原理和电泳结果的分析。
实验四：人类基因组DNA的提取及电泳分析
1.掌握基因组DNA提取的原理和步骤。
2.掌握琼脂糖凝胶电泳分析基因组DNA的方法。
实验五：质粒DNA的提取及电泳分析
1.掌握碱裂解法小量提取质粒DNA的原理和方法。
2.掌握琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA的方法。
实验六：DNA的限制性酶切及电泳分析
1.掌握重组质粒DNA的酶切鉴定方法。
2.掌握琼脂糖凝胶电泳分析酶切结果。
实验七：真核细胞质RNA的提取及电泳分析
1.掌握哺乳动物细胞RNA分离及其琼脂糖凝胶电泳的检测方法；
2.了解植物细胞RNA分离方法。
实验八：Southern 印迹转移
掌握目的DNA片段的转移原理与方法。
实验九：RT-PCR及其产物电泳分析
1.熟悉RT-PCR反应的原理。
2.掌握RT-PCR反应的操作步骤以及PCR反应参数的选择与优化。
3.掌握PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测方法。
实验十：探针标记、分子杂交
1.掌握非放射性标记物的标记方法
2.掌握分子杂交的原理及方法。
3.了解放射性标记物的标记及分子杂交的原理与方法。
实验十一：洗膜、显影
1.掌握洗膜、显影的基本原理与操作步骤。
2.掌握核酸杂交信号的分析方法。
实验十二：PCR－SSCP分析
1.掌握PCR-SSCP分析的原理、基本流程、影响因素。
2.掌握聚丙烯酰胺凝胶原理及制作过程。
3.掌握PCR－SSCP结果的分析方法。
实验十三：分子生物学实验技术教学录相
通过观看录相，加强对分子生物学各个实验技术的掌握。
实验项目的设置与内容提要
序号 |
实验项
目名称 |
实验
时数 |
实验
类型 |
实验
要求 |
实验
类别 |
内容提要 |
1 |
分子生物学基本实验操作技能及感受态细胞的制备 |
6 |
基础性 |
必修 |
技术基础 |
1．学生通过学习要求了解分子生物学实验常用装置和常用仪器设备的使用。
2. 感受态细胞的制备：菌种划线培养→挑取单克隆转入液体培养→扩大培养→离心收集细菌→以0.1mol/L CaCl2致敏细菌→离心收集细菌→再以0.1mol/L CaCl2重新悬浮→加入甘油至终浓度为10%→ -70℃冻存备用。 |
2 |
大肠杆菌转化 |
4 |
基础性 |
必修 |
技术
基础 |
取质粒DNA（约50ng）→加至已融化的感受态细胞中→冰浴30min→42℃水浴60 s→37 ℃ 200转/分振摇60 min→取适量铺平板→37 ℃温箱过夜→次日挑取单克隆转入液体培养，进一步鉴定。 |
3 |
琼脂糖凝胶电泳 |
4 |
基础性 |
必修 |
技术基础 |
将制胶模具封好，放好梳板备用→制备合适浓度的凝胶，在凝胶中加入一定浓度的溴乙锭并倒入到模具中→待凝胶冷却后，撕去模具两端的透明胶带，将模具置于装有电泳缓冲液的电泳槽中→取出梳板，点入样品，接通电源→一定时间后，停止电泳，置紫外透射仪上观察并照相。 |
4 |
人类基因组DNA的提取及电泳分析 |
4 |
综合性 |
必修 |
技术基础 |
用细胞裂解液裂解细胞膜，收集细胞核，加入SDS破碎核膜，用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA上解离下来，经苯酚﹑氯仿抽提去除蛋白质，无水乙醇沉淀DNA，75%乙醇洗涤DNA沉淀，真空干燥后，溶解于TE中即得到高分子量的DNA。然后经1.0%琼脂糖凝胶电泳分析DNA的质量。 |
5 |
质粒DNA的提取及电泳分析 |
4 |
综合性 |
必修 |
技术基础 |
采用碱裂解法小量提取质粒DNA。首先收获过夜培养的细菌，然后通过在低盐、高pH值情况下的变性和高盐、低pH值情况下的复性，以及通过苯酚、氯仿去除蛋白质等过程将质粒DNA分离、纯化。并用1.0%琼脂糖凝胶电泳分析质粒DNA。 |
6 |
DNA的限制性酶切及电泳分析 |
4 |
基础性 |
必修 |
技术基础 |
限制性核酸内切酶能够识别双链DNA中特定的碱基顺序，EcoRI酶的识别切割顺序为 5′GAATTC 3′, 切割后产生3′粘性末端；实验所用的重组质粒为我系构建，用EcoRI酶切割重组质粒，琼脂糖凝胶电泳分析酶切结果，如果切下的片段和插入的片段基本相符，说明克隆基本成功，最后还需测序验证。 |
7 |
真核细胞质RNA的提取及电泳分析 |
4 |
基础性 |
必修 |
技术基础 |
通过使用裂解液使细胞质中的RNA释放出来，通过离心，在RNA分离的较早阶段去除细胞核，从而去除了基因组DNA。然后，利用苯酚-氯仿抽提除去蛋白质，达到纯化RNA的目的。分离的RNA再通过琼脂糖凝胶电泳鉴定其质量。 |
8 |
Southern 印迹转移 |
4 |
基础性 |
必修 |
技术基础 |
限制性内切酶消化目的DNA、琼脂糖凝胶电泳分离、DNA在原位变性及中和、将DNA从凝胶上转移到尼龙膜上。 |
9 |
RT-PCR及其产物电泳分析 |
6 |
基础性 |
必修 |
技术基础 |
逆转录-PCR (RT-PCR)方法由两部分组成：（1）cDNA的合成：以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下，以Oligo(dT)16合成与mRNA互补的cDNA片断；（2）PCR扩增：以上述合成的cDNA为模板，使用一对特异引物在耐热的DNA聚合酶作用下，进行变性、退火、延伸，合成与模板互补的新的DNA分子。这三个过程组成一个循环周期，每个周期的产物又可作为下一周期的模板，如此循环往复，经过一定次数循环后，目的DNA分子的拷贝数大量增加。 |
10 |
探针标记、分子杂交 |
4 |
基础性 |
必修 |
技术基础 |
1．地高辛标记DNA探针：在大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ水解的Klenow大片段的催化下，合成与模板DNA互补的DNA链。反应体系中除dATP、dGTP、dCTP三种脱氧核苷酸底物外还含有DIG标记的dUTP,可通过聚合反应掺入到新合成的链中形成地高辛标记的DNA探针。
2．预杂交与杂交：在适当的条件下，地高辛标记的多核苷酸链探针根据碱基互补配对原则与待测样品中互补的核苷酸序列形成双链结构，洗膜后通过抗地高辛抗体的偶联反应及酶底物显色的方法来检测待测样品中的特定核苷酸序列。 |
11 |
洗膜、显影 |
4 |
基础性 |
必修 |
技术基础 |
在一定温度下,使用较低离子强度的溶液,将杂交滤膜上未与目的DNA特异结合的探针洗去，经连接有碱性磷酸酶的地高辛标记抗体作用，在显影、定影后显示出特异的杂交区带。 |
12 |
PCR－SSCP分析 |
4 |
基础性 |
必修 |
技术基础 |
制备小型聚丙烯酰胺凝胶；PCR扩增产物变性后上样电泳。观察并分析PCR-SSCP实验结果。 |
13 |
分子生物学实验技术教学录相、
实验考试 |
3
1
|
基础性 |
必修 |
技术基础 |
系统观看涉及到分子生物学实验技术领域的教学录相，使学生进一步加强对分子生物学实验技术的掌握。 |
五、课程学时分配
授课内容 |
总学时 |
理论学时 |
实验学时 |
绪论 |
2 |
2 |
0 |
基因与基因组 |
12 |
4 |
8 |
基因表达的调控 |
6 |
6 |
0 |
DNA损伤与修复 |
12 |
4 |
8 |
基因结构与表达分析的基本策略 |
18 |
6 |
12 |
基因工程与基因体外表达 |
14 |
6 |
8 |
蛋白质组学的研究方法和进展 |
12 |
4 |
8 |
疾病产生的分子基础 |
8 |
4 |
4 |
基因诊断 |
14 |
6 |
8 |
基因治疗的原理与研究概况 |
6 |
6 |
0 |
讲座 |
6 |
6 |
0 |
学术研讨 |
2 |
2 |
0 |
总计 |
112 |
56 |
56 |
|